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【場(chǎng)景應(yīng)用】濾光片在流式細(xì)胞儀中的應(yīng)用

2023-09-20

流式細(xì)胞儀(flow cytometry,F(xiàn)CM)是測(cè)量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀,是在單個(gè)細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對(duì)細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)(如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等)進(jìn)行快速測(cè)量并可分類收集的高技術(shù)。


流動(dòng)細(xì)胞儀主要有以下五部分構(gòu)成:
01流動(dòng)室及液體驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)
02激光光源及光束形成系統(tǒng)
03光學(xué)系統(tǒng)
04系統(tǒng)檢測(cè)與儲(chǔ)存、顯示、分析系統(tǒng)
05細(xì)胞分選系統(tǒng)



其中,激光光源及光束形成系統(tǒng)中的激光激發(fā)是流式細(xì)胞儀中信號(hào)熒光的主要測(cè)定,熒光信號(hào)的強(qiáng)弱與激發(fā)光的強(qiáng)度和照射時(shí)間相關(guān)。激光是一種相干光源,它能提供單波長(zhǎng)、高強(qiáng)度、高穩(wěn)定性的光照,正是能達(dá)到這一要求的理想的激發(fā)光光源。

在激光光源和流動(dòng)室之間有兩個(gè)圓柱形透鏡,將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm),在這種橢圓形激光光斑內(nèi)激光能量成正態(tài)分布,使通過激光檢測(cè)區(qū)的細(xì)胞受照強(qiáng)度一致。
而光學(xué)系統(tǒng)則是由若干組透鏡、小孔、濾光片組成,大致可分為流動(dòng)室前和流動(dòng)室后兩組。



流動(dòng)室前的光學(xué)系統(tǒng)由透鏡和小孔組成,透鏡和小孔(一般為2片透鏡、1個(gè)小孔)的主要作用是將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束,使激光能量成正態(tài)分布,使通過激光檢測(cè)區(qū)的細(xì)胞受照強(qiáng)度一致,最大限度的減少雜散光的干擾。

流動(dòng)室后的光學(xué)系統(tǒng)主要由多組濾光片組成,濾光片的主要作用是將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送到不同的光電倍增管。

濾光片主要有三類:
01:長(zhǎng)波通濾光片(LPF)--只允許特定波長(zhǎng)以上的光線通過;
02:短波通濾光片(SPF)--只允許特定波長(zhǎng)以下的光線通過;
03:帶通濾光片(BPF)--只允許特定波長(zhǎng)的光線通過。
不同組合的濾片可以將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送到不同的光電倍增管(PMT),如接收綠色熒光(FITC)的PMT前面配置的濾光片是LPF550和BPF525;接收色橙紅色熒光(PE)的PMT前面配置的濾光片是LPF600和BPF575;接收紅色熒光(CY5)的PMT前面配置的濾光片是LPF650和BPF675。

 

流式細(xì)胞儀主要應(yīng)用在對(duì)細(xì)胞的分選上。隨著計(jì)算機(jī)技術(shù),免疫學(xué)的發(fā)展以及單克隆抗體技術(shù)的發(fā)明,現(xiàn)在在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛,如細(xì)胞動(dòng)力學(xué)分析、細(xì)胞調(diào)亡、細(xì)胞分型、腫瘤的診斷、藥物療效分析等許多領(lǐng)域。
濾光片一直都是久晶的“王牌“產(chǎn)品,也得到了許多醫(yī)藥行業(yè)客戶的青睞。專業(yè)的顧問團(tuán)隊(duì),幫助您快速解決濾光片精準(zhǔn)選型問題,歡迎大家來咨詢!

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